本产品是基于鲁米诺底物的化学发光试剂盒，能够被辣根过氧化物酶（HRP）催化发光。本试剂盒优化了底物组成，使用了新型高效增强剂，发光强度比ECL Plus显色液提高了10-100倍，并有效地降低了背景。试剂盒使用新的氧化剂代替不稳定的双氧水，提高了试剂盒的稳定性，室温可稳定放置1年。工作液被HRP催化后，发出特定波长荧光（400-450 nm），可对X光胶片曝光，也可直接使用荧光CCD 扫描，主要应用于Western检测以及化学发光免疫检测系统。

对于中高丰度的目的蛋白的检测，例如内参蛋白等的检测，推荐使用性价比更高的ECL Plus产品（#A10016）。对于低丰度较难检测的目的蛋白，例如膜蛋白，转录因子等核蛋白，蛋白激酶等的检测，优先推荐使用检测灵敏度最高的ECL Super产品（#A10017）。由于ECL Super产品（#A10017）灵敏度极高，在中高丰度蛋白使用中时，会造成背景比较脏。

使用ECL Super产品（#A10017）检测低丰度蛋白时，如果背景较高，是由于抗体过量导致，请提高抗体稀释度。

平时使用，可以37ºC避光保存。长期不用，建议4ºC避光保存，一年有效。-20ºC避光保存。-20ºC可以保存更长时间。

1.Western实验步骤按照标准试验流程进行。

2.工作液的配制：等体积混合适量 A液和B液，室温放置备用。工作液宜在临检测前配制。

3.Western二抗孵育后，并进行数次洗涤后，用镊子将膜取出，用吸水纸略吸去过多的液体(切勿接触膜的蛋白面)，然后置于一洁净保鲜膜上。

4.根据膜的大小，按每10平方厘米膜加1ml工作液的比例，滴加工作液到膜上，确保使工作液均匀覆盖在膜上，放置1-2分钟。

5.取膜，弃工作液，用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间，随后进行压片检测或化学发光成像仪检测。

6.压片检测：将膜固定于片夹内。暗室内压片1分钟，立即显影定影，根据结果再调整压片时间。或直接分别压片30秒、1、3、5分钟，然后一起显影定影观察结果。

7. 化学发光成像仪检测：将膜放置到化学发光成像仪内，参考仪器说明书进行检测。

A10017S：ECL Super A液 50ml，ECL Super B液 50ml；

A10017M：ECL Super A液 250ml，ECL Super B液 250ml；

1） 试剂盒Solution I为底物，保存于避光试剂瓶中，Solution II为氧化剂。通常取样顺序是先取底物Solution I, 换枪头后再取氧化剂Solution II。

2） 本试剂盒较为稳定，室温（25℃）可以保存一年以上，长期不用建议保存在2-8℃。

3） 使用生物素-亲和素系统时，避免使用牛奶封闭，可能会造成背景过高。

4） 金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点，避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子，可以使用平头塑料镊子。

5） 叠氮化钠抑制HRP的催化能力，在缓冲液中尽量避免使用叠氮化钠作为防腐剂。

6） 封闭、洗膜、孵育等步骤耗时较长，注意膜与塑料界面的摩擦不均匀可能造成部分位置条带消失，可以在保鲜膜中孵育以及封闭，洗膜的塑料盒底面不要有明显凸起，可以通过剪角的方法，区别转印膜有蛋白的一面。

7） 不同转印膜对蛋白的吸附能力不同，硝酸纤维素较软，避免出现折痕。PVDF膜使用前需要使用甲醇水化均匀。

8） 勿将多张膜置于同一个洗膜盒中洗膜，相互吸附以及摩擦可能造成很深的背景。

9） 转印、封闭、孵育都要避免气泡。