我们使用多种不同的蛋白组分和随机多肽库作为抗原,通过几十次免疫,上百次融合,对用户感兴趣的蛋白组开发上万个不同单克隆抗体的细胞株,并制备腹水文库。这些腹水被点制在MabArray芯片上,被用于高通量、高覆盖度、无偏见、可重复地检测各种样本里各种蛋白表达量的变化。
为了最大程度利用样本资源,我们采用3种方法,开发高度覆盖目标蛋白组的单克隆抗体腹水文库。
(1)针对客户感兴趣的组织、细胞器或全蛋白组,提取蛋白进行浓缩。并对蛋白组按照分子量做进一步拆分,每个组分300-500个蛋白,从而降低蛋白组的复杂度并保证不同分子量的蛋白均获得满意的免疫效果。拆分后的蛋白组分质控合格后,分别单独免疫小鼠,制备1万-5万个特异性识别目标蛋白组的单抗文库。
(2)如果有已报道过的重要蛋白,可用Abmart的SEAL单克隆抗体开发平台,逐一特别开发特异性抗体,增加覆盖。
(3)我们还可以采用质谱学方法重新鉴定差异样本中的关键蛋白,并利用SEAL平台逐一特别开发特异性抗体,增加覆盖。
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