绿色荧光蛋白广泛应用于蛋白定位和蛋白动力学分析。GFP-beads是GFP-tag antibody 与琼脂糖凝胶微球（Agarose）偶联，专门用于纯化和检测细胞裂解液或菌体裂解液中的GFP标签蛋白。适用于IP实验。当细胞或菌体裂解液与本试剂混合，样本中的GFP标签重组蛋白与GFP beads特异性结合，其他杂蛋白不结合。本试剂结构稳定，结合GFP标签蛋白效率高。IP产物可以应用于质谱分析、 酶活性测定等生化分析手段中。

本产品是特别制备的GFP beads产品，使用该产品进行IP实验，在后续的IP-WB步骤中，可以完全避免抗体轻重链的条带出现。

1. 收集细胞：

对于一个免疫共沉淀反应 ，推荐使用 10⁶-10⁷ 个表达GFP 融合蛋白的哺乳动物细胞。服出培养液， 加lml预冷PBS于细胞中并刮下细胞，之后将细胞转入预冷管中。4℃，500g离心3分钟，弃上清液。用预冷PBS洗两遍细胞沉淀物，轻轻重悬细胞。

2. 裂解细胞：

(1) 用 200μl预冷的Lysis buffer 重悬细胞．

注：在Lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂（推荐使用cocktail类型的蛋白酶抑制剂，货号A10004：200X 蛋白酶抑制剂复合物）

(2) 将离心管放在冰上30分钟，每10分钟重悬一次细胞。

(3) 16000g，4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的预冷离心管中，加300μ1 dilution Buffer,丢掉沉淀。

注：在这步细胞溶解物可放入-80℃长期保存。同样需要在在dilution buffer中加入蛋白酶抑制剂。

3. 平衡beads：涡旋anti-GFP Agarose，吸取25μ1 anti-GFP Agarose至预冷500μ1 dilution buffer中， 1200g, 4℃离心2分钟，去掉上清，重复两次。

4. 结合蛋自：

(1) 将第3步获得的细胞蛋白提取液加入平衡后的anti-GFP Agarose中（如有需要，可取50μ1上清液作为input对照用于免疫印迹分析），在4℃环境中上下颠倒孵育1小时。

(2) 1200g , 4℃离心2分钟，去掉上清。

5. 洗anti-GFP Agarose：重悬GFP beads于500μl预冷的溶解液中，1200g, 4℃离心2分钟，去掉上清，重复2-3次。

可选做：在第二次清洗中将盐浓度提高到500mM。

6. 洗脱结合蛋白：

(1) 100μl SDS loading buffer重悬anti-GFP Agarose。

(2) 将anti-GFP Agarose在95℃中加热10分钟，使免疫复合物分离出来。1200g, 4℃离心2分钟， 取上清跑SDS-PAGE。

(3) 如果后续IP产物需要进行质谱鉴定，可以使用以下方法来替代步骤（1）和（2）：加50 μl 0.2M,PH2.5的甘氨酸-盐酸重悬anti-GFP Agarose，保持混匀状态孵育30s, 1200g, 4℃离心2分钟。将上清转移至新的离心管中，加入5μl lM PH10.4的Tris base中和，可重复此步骤来增加洗脱效率。

储存于4°C，禁止冻存。保质期12个月。

AB_2936244

#M20001 His-Tag (2A8) Mouse mAb
#M20002 Myc-Tag (19C2) Mouse mAb
#M20003 HA-Tag (26D11) Mouse mAb
#M20004 GFP-Tag (7G9) Mouse mAb
#M20007 GST-Tag (12G8) Mouse mAb
#M20008 DYDDDDDK-Tag (3B9) Mouse mAb (Binds to same epitope as Sigma’s Anti-FLAG M2 Antibody)
#M20012 Anti-Myc-Tag Mouse mAb (Agarose Conjugated)
#M20013 Anti-HA-Tag Mouse mAb (Agarose Conjugated)

#M20018 Anti-DYKDDDDK-Tag Mouse Antibody (Agarose Conjugated) (Same as Sigma’s Anti-FLAG M2)

#M20118 Anti-DYKDDDDK-Tag Mouse Antibody (Magnetic Beads) (Same as Sigma’s Anti-FLAG M2)