Glutathione Beads 可以一步纯化各种表达系统表达的谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖

性蛋白和谷胱甘肽转移酶的重组衍生物。Glutathione Beads 是以 4%琼脂糖凝胶为基质，

通过 12 个原子的间隔臂，用化学方法共价结合了还原型谷胱甘肽制作而成。这种特别设计

使树脂的纯化效率得到了提高，因此树脂载量大于 20mg GST 融合蛋白。Glutathione

Beads 具有载量高、特异性好、性价比高的特点

2.1 Buffer 的准备

所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。

平衡/洗杂液: 140 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na 2 HPO 4 , 1.8 mM KH 2 PO 4 , pH 7.4

洗脱液: 50 mM Tris-HCl, 10 mM 还原型谷胱甘肽, pH 8.0

注意: 平衡液和洗脱液中可加入 1–10 mM DTT。

2.2 样品准备

样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率

和防止堵塞柱子。

2.3 样品纯化

1) 将 Glutathione Beads 装入合适的层析柱，用 5 倍柱体积的平衡液进行平衡，使填料

处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

2) 将样品加到平衡好的 Glutathione Beads 中，保证目的蛋白与 Glutathione Beads 充

分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液。

3) 用 10-15 倍柱体积的洗杂液进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4) 使用 5-10 倍柱体积的洗脱液，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

5) 依次使用 3 倍柱体积的平衡液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料，然后保存在等体积的

20%的乙醇中，置于 2-8 度保存，防止填料被细菌污染。

2.4 纯度检测

将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用

SDS-PAGE 检测纯化效果。

3. 填料清洗

GST 标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋

白的聚集，往往造成流速和结合载量性能下降，这时需要对树脂进行清洗。

去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法

用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。

去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的 1% Triton X-100 清洗，然后立即用 5 倍柱

体积的 PBS, pH 7.4 清洗。

#M20001 His-Tag (2A8) Mouse mAb
#M20002 Myc-Tag (19C2) Mouse mAb
#M20003 HA-Tag (26D11) Mouse mAb
#M20004 GFP-Tag (7G9) Mouse mAb
#M20007 GST-Tag (12G8) Mouse mAb
#M20008 DYDDDDDK-Tag (3B9) Mouse mAb (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG M2 Antibody)
#M20012 Anti-Myc-Tag Mouse mAb (Agarose Conjugated)
#M20013 Anti-HA-Tag Mouse mAb (Agarose Conjugated)

#M20018 Anti-DYKDDDDK-Tag Mouse Antibody (Agarose Conjugated) (Same as Sigma's Anti-FLAG M2)

#M20118 Anti-DYKDDDDK-Tag Mouse Antibody (Magnetic Beads) (Same as Sigma's Anti-FLAG M2)