1. 柠檬酸钠-EDTA 抗原修复液(Citrate-EDTA Antigen Retrieval Solution)是一种常用的抗原修复液，结合了柠檬酸钠和EDTA进行抗原修复的优点，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。

2. 细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-link)，从

而遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果。

3. 本抗原修复液采用了常用的柠檬酸钠缓冲液和EDTA，结合了两者修复抗原的优点，并经过适当优化，可以更加有效地去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

4. 通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果，但对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善。特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时，可以考虑尝试进行抗原修复。从原理上来看，无论冰冻切片还是细胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定的样品，进行抗原修复都会有效去除蛋白之间的交联，充分暴露抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

5. 本产品特别适合用于石蜡切片，也可以用于冰冻切片等其它样品。

6. 一个包装的本产品可以配制成4000 mL抗原修复液(1X)。按照每个片子需要10毫升抗原修复液(1X)计算，一个包装的本产品可以用于400个样品。

4℃或-20℃保存，一年有效。

1. 对于石蜡切片：

a. 脱蜡：切片在二甲苯中脱蜡5 分钟，再换用新鲜的二甲苯脱蜡，共用二甲苯脱蜡3 次。无水乙醇5 分钟，两次。90%乙醇5 分钟，两次，70％乙醇5 分钟，一次。蒸馏水5 分钟，两次。

b. 抗原修复：将切片浸泡在抗原修复液(1X)中，95-100℃加热约5分钟2次(加热时间可以控制在10-20 分钟内，最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1X)

使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用

微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20-30 分钟内冷却至室温。用

PBS 洗涤液洗涤1-2 次，每次3-5 分钟。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。

2. 对于冰冻切片：

用PBS 洗涤液洗涤切片5 分钟。将切片浸泡在抗原修复液(1X)中，95-100℃

加热约5 分钟X2 次(加热时间可以控制在10-20 分钟内，最佳的加热时间需根据不同的样品和

目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1X)使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，

也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约

在20-30 分钟内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤1-2 次，每次3-5 分钟。随后即可进行封

闭等后续的免疫染色步骤。

3. 对于其它样品的抗原修复：

可以参考石蜡切片或冰冻切片的步骤进行。

1. 如果组织材料为小鼠组织样本，可能会由于组织中残留的小鼠血液导致背景信号过强，推荐使用mouse on mouse实验的专用封闭液。货号：A10025 IHC封闭液（鼠源组织避免交叉反应专用款）。

2. IHC实验建议使用带有酶聚合物(HRP polymer)标记二抗或者试剂盒，可有效增强IHC显色反应。推荐货号：A10026 SignalEnhance IHC KIT（信号增强型免疫组化试剂盒，兔一抗）和A10027 SignalEnhance IHC KIT（信号增强型免疫组化试剂盒，鼠一抗）。