SignalEnhanceGoat anti Mouse antibody, 用聚合标记方法将过氧化物酶连接到二抗上,形成超大分子抗体-酶聚合物 (HRP polymer),替代传统方法中的二抗或者三抗。这种聚合物拥有强大的信号放大能力,同时有很强的组织细胞渗透力,特别适合免疫组化的应用。此系列检测试剂与传统的方法比较具有简单,快速,高敏感,低背景等特点。
如图所示,A使用Abmart常规二抗(M21001)染色结果,B为SignalEnhance Goat anti Mouse antibody(A10030)染色的结果。实验材料为石蜡包埋的人胃癌组织样本,一抗为一个膜蛋白的小鼠单抗。
结果显示:B图有明显的膜阳性染色,且背景很干净。
4℃可保存一年,应避免冷冻。
1.防脱玻片
2.PBS(pH7.2-7.6)
3.抗原修复液(推荐使用柠檬酸钠-EDTA抗原修复液,同时具有柠檬酸钠和EDTA 抗原修复液的优点。货号:A10028)
石蜡切片热修复抗原染色程序:
1.制备切片,常规脱蜡至水。
2.添加内源性过氧化物酶阻断剂(3%H2O2),室温10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗2分钟×3 次。
3.根据抗原抗体情况,必要时对切片进行抗原热修复或消化处理。
4.滴加封闭液,室温10分钟。甩去多余液体, 不洗。
5.滴加适当稀释的一抗(兔 IgG),20-37℃ 1~2小时或4℃过夜。0.01M PBS洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间、温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。
6.滴加聚合 HRP 标记抗兔IgG, 37℃孵育30分钟,PBS或TBS冲洗,2分钟×3次。
7.DAB显色:取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C 试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间,一般5-30分钟。蒸馏水洗涤。
8.苏木素轻度复染,脱水,透明,封片,观察。
1.载玻片经防脱片剂处理(Poly-L-Lysine)。抗凝血经分层离心后涂片;培养细胞也可涂片或贴片生长;冰冻切片室温风扇吹干。
2.固定方案用4%多聚甲醛或丙酮固定10-20 分钟。
3.30%H2O21份+纯甲醇50份混合,室温浸泡30 分钟,以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2 次。
其余步骤和石蜡切片3-8 步相同。
如果冰冻切片直接染色结果不理想时,可以参照石蜡切片对切片进行热修复,步骤和石蜡切片3-8 步相同。
Note: Application as IHC, only suitable for histochemical staining or fluorescence staining of paraffin-embedded sections. Application as ICC/IF, suitable for histochemical or fluorescent staining of frozen sections, as well as chemical and fluorescent staining at the cellular level.
注意:抗体应用为IHC的,抗体只适合于石蜡切片的组化染色或者荧光染色。
抗体应用为IF/ICC的,抗体适合于冰冻切片的组化染色或者荧光染色,以及细胞水平的化学染色和荧光染色。
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