本品细胞/组织裂解液，WB/IP裂解液，是一种非变性条件下的裂解液，能维持原有的蛋白间的相互作用。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和Co-IP等实验。

冰袋运输。短期4℃保存，长期-20℃保存，一年有效。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。

一、培养细胞样品

1. 融解裂解液，混匀，取适当量的裂解液。

注：需要使用前数分钟内，添加PMSF或者cocktail形式的蛋白酶抑制剂，以确保得到最好的实验结果。推荐使用复合型蛋白酶抑制剂（A10004）和复合型磷酸酶抑制剂（A10014）。

2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。悬浮细胞：离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)，用手指把细胞用力弹散。按照（6孔板每孔加入150-250 μL；60 mm培养皿/75 cm2 培养瓶加入 0.5 ml；每 10⁷ 细胞/100 mm培养皿/150 cm2 培养瓶加入 1 ml；）裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。细胞充分裂解后应无没有明显的细胞沉淀。

3. 充分裂解后，建议进行超声，以帮助提高细胞核蛋白和细胞膜蛋白的提取效率。设置功率30W或者总功率的30%，打3秒停3秒，根据裂解液多少，细胞超声5-10次，超声全程需要冰浴，超声后溶液会变得澄清以及不再粘稠；然后10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

二、组织样品

1. 用干净的工具切取目标组织，此操作最好在冰上进行，并且应尽快完成，以防止样品被蛋白酶降解。

2. 融解裂解液，混匀，取适当量的裂解液。

注：需要使用前数分钟内，添加PMSF或者cocktail形式的蛋白酶抑制剂，以确保得到最好的实验结果。推荐使用复合型蛋白酶抑制剂（A10004）和复合型磷酸酶抑制剂（A10014）。

3. 按照每10 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）

4. 用电动匀浆器进行匀浆，直至充分裂解。组织样本匀浆之后，需要进行超声处理，设置功率30W或者总功率的30%，打3秒停3秒，根据裂解液多少，组织超声15-20次，超声全程需要冰浴，超声后溶液会变得澄清以及不再粘稠，同时沉淀会显著较少。此时，可以进行后续实验，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。如果超声后，沉淀仍然比较多，建议再超声10-20次。

1）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

2）裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA法或者氨基黑法等蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！