外泌体是由细胞分泌的包含RNA 和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。宇玫博生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒，组分经过优化处理，适用于细胞培养上清液中的外泌体提取，并搭配纯化过滤装置，可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒，可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸和蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

1、高速离心机（可达到10000g离心力），涡旋振荡器； 2mL 离心转子；1.5 mL 离心管；

2、1×PBS 缓冲液（无菌）；

一、 样品预处理

1. 取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置于冰上；如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；

2. 收集细胞培养上清液20mL。

离心去细胞碎片：将样品转移至离心管中，于4℃以3000 g 离心10 min，去除样品中的细胞碎片；（注：若沉淀较多，可3000g/10min离心多次至无明显沉淀，每次取

1. 离心上清液）。

2. 上清液转移：去除细胞碎片的离心上清液转移到新的50mL离心管中；

一、 提取外泌体

1. 上清液预处理：在去除杂质的离心上清液中加入Exosome Concentration Solution（按照每20mL细胞上清加入5mL Exosome Concentration Solution的比例）。

2. 溶液混合：加入ECS 试剂后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再放置于4℃

静置至少2 h；（增加静置时间可提高外泌体得率，但静置时间不可超过24h）

3. 沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于4℃以10000 g 离心60 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒；（注：尽可能吸净上清液）

4. 外泌体重悬：取1×PBS 均匀吹打离心沉淀物（按照每20mL细胞培养上清加入0.2mL PBS的比例），待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5 mL 离心管中；

5. 收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12000 g 离心2 min，保留上清液，该上清液中富含外泌体颗粒。（注：若沉淀较多，可12000 g /2min 离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液）

二、 纯化外泌体

1． 纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于4℃以3000 g 离心10 min，离心后收集EPF 柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒；（注：EPF 柱不可重复使用）

2． 外泌体的保存： 纯化后的外泌体以50-100 μL 进行分装保存于-80℃低温冰箱中，以备后继实验使用。

室温可稳定保存24 个月，使用前请充分混匀。