MYC是一种包含以下10个氨基酸的多肽序列：EQKLISEEDL。

本产品是特别制备的MYC beads产品，使用该产品进行IP实验，在后续的IP-WB步骤中，可以完全避免抗体轻重链的条带出现。

1. 收集细胞：

对于一个免疫共沉淀反应 ，推荐使用 10⁶-10⁷ 个表达HA 融合蛋白的哺乳动物细胞。服出培养液， 加lml预冷PBS于细胞中并刮下细胞，之后将细胞转入预冷管中。4℃，500g离心3分钟，弃上清液。用预冷PBS洗两遍细胞沉淀物，轻轻重悬细胞。

2. 裂解细胞：

(1) 用 200μl预冷的Lysis buffer 重悬细胞．

注：在Lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂（推荐使用cocktail类型的蛋白酶抑制剂，货号A10004：200X 蛋白酶抑制剂复合物）

(2) 将离心管放在冰上30分钟，每10分钟重悬一次细胞。

(3) 16000g，4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的预冷离心管中，加300μ1 dilution Buffer,丢掉沉淀。

注：在这步细胞溶解物可放入-80℃长期保存。同样需要在dilution buffer中加入蛋白酶抑制剂。

3. 平衡beads：

1) 涡旋 Anti-MYC Magarose Beads, 吸取 25uL （包含混悬液）放在 1.5ml 离心管中。

2) 加入 1ml dilution buffer （也可用 1xPBST（0.05%Tween-20）代替）,手拿上下晃动 60 秒，不要太剧烈。

3) 放入磁力架静置分离磁珠 60 秒，直到上清液澄清，丢掉上清液，重复 3 次。

4. 结合蛋自：

1) 将第 2 步获得的细胞蛋白提取液，加入平衡后的 Anti-MYC Magarose Beads 中。

2) 4℃上下颠倒孵育 1-3 小时。（也可以过夜）

5. 洗anti- MYC Agarose：

1) 用磁力架静置分离磁珠，直到上清液澄清，丢弃上清液。（如果需要，保存 50uL 上

清液以供进一步分析）。

2) 再加 1ml dilution buffer （也可以用 1xPBST（0.05%Tween-20）代替）悬浮磁珠。

3) 磁力架静置分离磁珠，丢弃上清液，重复此步骤至少 4 次。

可选做：在第二次清洗中将盐浓度提高到500mM。

6. 洗脱结合蛋白：

1) 除去剩余的上清液。

2) 用 30ul 1XSDS loading buffer 重悬磁珠。

3) 将磁珠在 95°C 中加热 10 分钟，使免疫沉淀复合物与磁珠分离。

4) 用磁力架静置分离磁珠，取上清跑 SDS-PAGE。

注： 如果后续IP产物需要进行质谱鉴定，可以使用以下方法来替代步骤1-3：

a) 除去剩余的上清液。

b) 加入 50-70uL 0.2M,PH2.5 的甘氨酸，并在 4°C 混匀 2-5 分钟

c) 用磁力架静置分离磁珠，把上清部分转移到新的离心管里

d) 立即用 15-20uL 1M，pH10.4 的 Tris 中和洗脱液，可重复上述步骤 2,3,4 以增加洗脱效率。

10ul磁珠可以结合3-4ug MYC的融合蛋白。

推荐使用裂解液

储存于4°C，禁止冻存。保质期12个月。

AB_2936264

#M20001 His-Tag (2A8) Mouse mAb
#M20002 Myc-Tag (19C2) Mouse mAb
#M20003 HA-Tag (26D11) Mouse mAb
#M20004 GFP-Tag (7G9) Mouse mAb
#M20007 GST-Tag (12G8) Mouse mAb
#M20008 DYDDDDDK-Tag (3B9) Mouse mAb (Binds to same epitope as Sigma’s Anti-FLAG M2 Antibody)
#M20012 Anti-Myc-Tag Mouse mAb (Agarose Conjugated)
#M20013 Anti-HA-Tag Mouse mAb (Agarose Conjugated)

#M20018 Anti-DYKDDDDK-Tag Mouse Antibody (Agarose Conjugated)

#M20118 Anti-DYKDDDDK-Tag Mouse Antibody (Magnetic Beads)