First-Strand cDNA Synthesis Kit是基于Reverse Transcriptase从Total RNA或Poly(A)+RNA合成 第一链cDNA的试剂盒。Reverse Transcriptase是在M-MLV (RNase H- ) Reverse Transcriptase基础上经过基因工程 改造后获得的全新逆转录酶，相较而言Reverse Transcriptase降低了RNase H活性且大幅度提高了热稳定性。 Reverse Transcriptase可耐受更高的反应温度，适用于具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。此外，Reverse Transcriptase增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录，可合成长达12.3 kb的第一链cDNA。 First-Strand cDNA Synthesis Kit包含合成第一链cDNA所需的所有组分，并提供Random Primers

RT SuperMix for qPCR是基于Reverse Transcriptase的逆转录反应预混液。Reverse Transcriptase 是在 M-MLV (RNase H- ) Reverse Transcriptase 基础上经过基因工程改造后获得的全新逆转录酶，相较而言 Reverse Transcriptase 降低了 RNase H 活性且大幅度提高了热稳定性。Reverse Transcriptase 可耐受更高的反应温度，适用于具有复杂二级结构的 RNA 模板的逆转录。

RT SuperMix for qPCR 适用于两步法 qRT-PCR 检测，5×SuperMix 中含有逆转录所需的所有成分，加入模板 RNA 和 RNase Free ddH₂O 就可以迅速进行反应。RNA 模板的体积最多可加到总体积的 80%，非常适合于低浓度 RNA 模板的逆转录反应。5×SuperMix 在-20℃不会冻结，使用方便。 本产品针对 qPCR 进行特别优化，经过比例优化的 Oligo (dT)23VN primer mix/Random primers，使 cDNA 合成可从 RNA 转录本的各个区域起始并具有相同的逆转录效率，最大程度保证了 qPCR 结果的真实性和可重复性。逆转录产物适用于 SYBR Green 和探针法 qPCR，可以根据实验目的，选择相应的试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。

将所有组分存放在-20℃并避光保存。

将所有组分存放在-20℃并避光保存。

在 RNase free 的 PCR 管中配制如下混合液。

No RT Control 反应(可选) No RT Control 是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应，用于检验 RNA 模板中是否有基因组 DNA 残留。 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液:

轻轻混匀上述反应物，瞬时离心，按下表设置逆转录程序：

注：Reverse Transcriptase 对具有复杂二级结构的 RNA 模板仍具有良好的扩增能力，因此通常建议在 42°C 进行反应，也可以在 45-50°C 进行反应，以便减少非特异性扩增和提高产量。

得到的逆转录产物可立即用于 qPCR 反应，也可分装后于-20°C 短期保存，-80°C 长期保存，避免反复冻融。

1. 实验在冰上操作，过程中避免RNase污染。

2. RNA的纯度会影响cDNA的合成量，RNA提取过程应注意防止RNA降解。

3. 5 × SuperMix及5 × No RT Control Mix含有高浓度的甘油，在使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液器 轻轻吸打充分混匀后，准确吸取。

4. 对于20 μl逆转录反应体系，建议加入不超过1 μg的Total RNA，如果目的基因表达量非常低，最多加入5 μg total RNA， 否则加入RNA量过高，可能会超出后续定量PCR的线性范围。

5. 如果加入RNA模板体积较大(如超过2 μl)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE中的EDTA会对逆转录反应产生抑制。

6. 如果在qPCR实验中发现No RT Control与实验组之间的CT值差< 5，则说明RNA模板有可能受到基因组DNA的污染。

7. cDNA产物仅适用于qPCR反应，不适用于克隆等下游实验的长片段PCR扩增。如有需要，推荐使用First-Strand cDNA Synthesis Kit或者First-Strand cDNA Synthesis SuperMix（货号J10002和J10007）。